Анализ крови РПГА — реакция пассивной гемагглютинации. Рпга анализ крови что это

РПГА при сифилисе

Анализ крови РПГА — что это при сифилисе? Это проведение реакции в ее классическом виде, при которой у пациента в сыворотки его крови выявляются циркулирующие антитела к возбудителю сифилиса. Этот способ является недорогим, быстрым, и позволяет первично использовать исследовать биологический материал для скрининга этой инфекции, для обследования доноров, сдающих кровь, для контактных лиц, близко общавшихся с больными.

Таким образом, РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Но это вовсе не значит, что если такие антитела выявлены, то это анализ может считаться недостоверным. Выявление антител к бледной спирохете является основой лабораторной диагностики сифилиса и его подтверждения. И реакция пассивной гемагглютинации относятся к специфическим или трепонемный тестам, поскольку в нем используются «настоящие», сифилитические антигены.

После того, как к специфическому диагностикуму добавляется сыворотка крови, больного сифилисом, то происходит гемагглютинация. Эти циркулирующие в крови антитела могут появиться уже через 2 недели после заражения. В этом случае речь идет об антителах «быстрого реагирования», или об иммуноглобулинах класса М. Через месяц они дополняются специфическими иммуноглобулинами класса G. Поэтому при начале заболевания эта реакция определяет только один вид антител, говорящих об острой инфекции, а во вторичном и третичном периоде сифилиса она «улавливает» антитела класса G, которых в крови накапливается довольно много. Именно поэтому чувствительность этой реакции при дебюте заболевания несколько ниже, а если человек болен сифилисом несколько лет, то ее чувствительность приближается к 100% против 86% в случае первичного, свежего и недавнего сифилиса.

Эта реакция является высокоспецифичной и с ее помощью можно подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, который был поставлен с помощью применения нетрепонемного теста. К таким нетрепонемным тестам относится RW или всем известная реакция Вассермана. При ее постановке в качестве антигена берется кардиолипиновый антиген, который не имеет никакого отношения к возбудителю. Он очень похож по своей структуре на сифилитический, но, все-таки, несколько отличается от него, и поэтому при этом виде исследования возможны ложноположительные реакции.


Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

Выявление в сыворотке крови специфических антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum), используемое для подтверждения результатов неспецифических тестов на сифилис, скрининга сифилиса, обследования контактных лиц и доноров крови.

Люэс, бледная трепонема.

Синонимы английские

Syphilis, passive hemagglutination test; Syphilis, indirect hemagglutination test; Treponema Pallidum Hemaglutination Assay, TPHA.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических (“нетрепонемных”), так и специфических (“трепонемных”) антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифические (“нетрепонемные”) и специфические (“трепонемные”). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к “трепонемным”, то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, “нетрепонемного” исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.

Чувствительность РПГА и других “трепонемных” тестов превосходит чувствительность неспецифических (“нетрепонемных”) тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять “трепонемные” тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой “трепонемный” тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.

Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза “сифилис” необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

  • Чтобы подтвердить диагноз “сифилис” при положительном результате неспецифического скринингового теста;
  • для скрининга сифилиса;
  • для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
  • для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

  • пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием “сухого” рубца (третичный сифилис);
  • лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
  • донора крови;
  • при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

  • первичный, вторичный, третичный, а также скрытый сифилис (приобретенный и врождённый);
  • беременность;
  • ВИЧ-инфекция;
  • гепатиты В и С;
  • употребление инъекционных наркотиков;
  • острый инфаркт миокарда;
  • диффузные заболевания соединительной ткани;
  • возвратный тиф;
  • лептоспироз;
  • клещевой боррелиоз;
  • тропические трепонематозы (фрамбезия, беджель, пинта);
  • воспалительные процессы, обусловленные сапрофитными трепонемами полости рта и гениталий;
  • злокачественные новообразования;
  • обширная травма и переломы;
  • бактериальный эндокардит;
  • туберкулез;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • поствакцинальная реакция.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие сифилиса;
  • первые 2-4 недели после инфекции T. pallidum.

Что может влиять на результат?

  • Результат анализа может быть ложноотрицательным в течение первых 2-4 (до 6) недель после заражения.



  • Исследование не позволяет дифференцировать;
    • сифилис (T. pallidum) и другие трепонематозы (T. pallidumsubspeciespertenue, endemicum, carateum);
    • ранний и поздний сифилис.
  • Исследование не предназначено для контроля лечения сифилиса.
  • Результат анализа следует оценивать вместе с дополнительными анамнестическими, лабораторными и инструментальными данными.
  • Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр
  • Treponema pallidum, IgM, титр
  • Treponema pallidum, IgG, титр
  • Treponema pallidum, IgG вликворе
  • Treponema pallidum, антитела
  • HIV 1, 2 Ag/Ab Combo (определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена p24)
  • Вирусный гепатит B. Контроль активности вируса перед началом лечения
  • Вирусный гепатит C. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц
  • Интимный – оптимальный – анализ мазка у мужчин
  • Интимный – оптимальный – анализ мазка у женщин
  • Госпитализация в хирургический стационар
  • Госпитализация в терапевтический стационар

Кто назначает исследование?

Дерматовенеролог, невролог, врач общей практики, эпидемиолог.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Особенности анализа

Из 10 человек расшифровку анализа крови РПГА знают не более половины. Под этой аббревиатурой подразумевается реакция пассивной гемагглютинации. Методика применяется для выявления внутренних патологических процессов, но особенно она эффективна при подозрении на сифилис.

Это обусловлено тем, что тест точно определяет антитела бледной трепонемы – микроорганизма, провоцирующего развитие сифилиса. При попадании в здоровый организм этого возбудителя иммунная система начинает активно вырабатывать антитела против него. Если тестирование показало присутствие возбудителя, пациенту нужно незамедлительно сдать дополнительные анализы на сифилис.

Условно тестирование можно разделить на 2 типа:

  • специфическое;
  • неспецифическое.

Классификация варьируется от типа антител, которые были выявлены в сыворотке крови. Главное преимущество анализа крови на РПГА заключается в том, что при помощи него можно выявить заболевание, вне зависимости от того, на каком этапе оно находится.

  • специфическое;
  • неспецифическое.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

  • проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
  • для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
  • исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
  • тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.
Читайте также:  Антибиотики и алкоголь: можно ли совмещать, возможные последствия

Обычно специалисты рекомендуют придерживаться таких правил:

Где сделать анализ и стоимость?

Тест пассивной агглютинации можно провести в клинических лабораториях кожно-венерологических диспансеров и других специализированных центров. Также такие исследования можно пройти в коммерческих лабораториях. Стоимость анализа РПГА на сифилис зависит от региона и составляет в среднем примерно 400 рублей.

Результаты реакции пассивной гемагглютинации являются наиболее точными и максимально информативными из всех методов лабораторной диагностики сифилиса. Поэтому узкопрофильные врачи наиболее часто используют именно этот метод для выявления заболевания, определение стадии его развития, а иногда и с целью косвенного определения эффективности проводимой терапии.

Есть много анализов, которые позволяют выявить бледную трепонему или следы ее присутствия. Разные тесты могут использоваться на разных этапах. Существуют также менее информативные, т.н. скрининговые тесты и более подробные – специфические.

Как сдают материал на исследование?

Анализ на сифилис РПГА может проводиться с применением венозной, капиллярной крови, а также спинномозговой жидкости (ликвора), забираемой при подозрении на поражение бледными трепонемами нервной системы (нейросифилис).

Во многих лабораториях для проведения теста используют венозную кровь.

Она набирается в чистые сухие пробирки или вакутайнеры без использования веществ-антикоагулянтов. Биоматериал помещается в термостат на час (T=37 ), после чего переносится на 60-90 минут в холодное место. Центрифугирование получившегося сгустка совершается в течение ¼ часа при 1000 оборотах в минуту.

После расслаивания образца жидкая часть быстро забирается на исследование, поскольку может наступить распад антител. При необходимости плазма может храниться 5 дней в холодном месте (2-8 С). Сильная заморозка допускается только однократно. Хранение такого материала возможно не более 1,5 месяцев. Исследование ликвора проводится в краткие сроки. Перед анализом спинномозговая жидкость не подготавливается.

В стандартных тест-системах (Эколаб) применяются следующие наборы:

  • пробирка с эритроцитами с содержащимися на поверхностной части антигенами патогенного возбудителя;
  • флакон, в котором находятся чистые кровяные тельца;
  • емкость с буферным раствором для разведения крови больного;
  • сыворотка инфицированного человека, применяемая для контроля;
  • сыворотка здорового пациента для сравнительного анализа;
  • пластмассовый планшет, имеющий нумерованные лунки для перемешивания образцов и определения результата.

Набор для проведения исследования содержит определенное число реактивов.


Для первичной формы сифилиса характерны сниженные показатели (менее 1:320). При вторичном венерическом заболевании выявляются повышенные значения титров (более 1:320). При скрытом течении инфекции показатели также занижены.

Что такое анализ крови РПГА

  1. Принцип проведения анализа
  2. Расшифровка результатов
  3. Правила сдачи анализа
  4. В каких случаях назначается РПГА


С помощью этого теста с 90% вероятностью удается обнаружить возбудителя заболевания на любом из четырех этапов развития сифилиса. Определяется при этом и уровень специфических антител в крови, по которым можно определить стадию заболевания. Также анализ РПГА позволяет выявить ложноположительные результаты исследований на сифилис, полученные во время проведения скрининговых тестов при беременности.

Для чего нужно сдавать анализ крови на РПГА

РПГА является одним из самых значимых анализов крови. Он позволяет выявить сифилис на любых стадиях, а также ряд других заболеваний. Этот анализ считается одним из самых точных методов выявления возбудителей сифилиса. В каких случаях пациента могут отправить на обследование и что значат результаты?

РПГА является реакцией пассивной гемагглютинации, а если точнее — анализом для выявления этого процесса. В ходе исследования легко можно обнаружить антигены бледной трепонемы, именно этот микроорганизм провоцирует сифилис. Если человек полностью здоров, бледная трепонема, попав в организм, провоцирует ответную реакцию со стороны иммунной системы — выработку особых антител. По их наличию и определяется, есть заболевание или нет.

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.

Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.


Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

Анализ крови РПГА — реакция пассивной гемагглютинации. Рпга анализ крови что это

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА/РНГА) основана на способности эритроцитов различных видов животных, птиц и человека (I(0) группы крови) адсорбировать на своей поверхности растворимые антигены бактерий или антитела.

Многие антигены бактерий способны спонтанно (антигены полисахаридной природы) или после предварительной обработки танином, бензидином или глюта-ровым альдегидом (антигены белковой природы) адсорбироваться на эритроцитах.

Такие комплексы называют эритроцитарными антигенными диагностикумами.

Иммуноглобулины также могут использоваться для сенсибилизации эритроцитов. В этом случае получают эритроцитарные антительные диагностикумы.

Участие эритроцитарных диагностикумов в специфических иммунных реакциях антиген—антитело обеспечивает пассивное скучивание и выпадение в осадок эритроцитов.

Реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) применяют с целью:
— обнаружения антител в сыворотке крови путем использования известного эритроцитарного антигенного диагностикума;
— выявления неизвестного антигена на основе его взаимодействия с известным эритроцитарным антительным диагностикумом.

а) Методика РПГА для обнаружения антител в сыворотке крови больных. Для постановки реакции необходимы:
— исследуемая инактивированная сыворотка больного (прогретая при 56 °С 30 мин);
— эритроцитарный антигенный диагностикум;
— гомологичная антигену контрольная иммунная сыворотка для РПГА в разведении 1:10;
— изотонический раствор натрия хлорида pH 7,0 ± 0,5;
— 40% раствор формалина;
— 10-50% взвесь несенсибилизированных эритроцитов барана;
— планшеты для иммунологических реакций с 96 круглодонными лунками;
— микропипетки.

Антигенные эритроцитарные диагностикумы представляют собой лиофилизированную в фосфатно-буферном растворе 1-10% взвесь эритроцитов барана, предварительно формалинизированных и сенсибилизированных антигеном микроорганизмов. Консервантом является формалин в конечной концентрации 0,5%. Диагностикумы выпускают в жидком или лиофильно-высушенном виде. В последнем случае они представляют собой аморфную массу, сформированную в таблетки красно-коричневого цвета. Регидратированный препарат готовят путем разведения этих таблеток в 10 мл 0,9% раствора натрия хлорида и получают 1% рабочую взвесь. Диагностикумы выпускают в комплекте с гомологичной диагностической агглютинирующей сывороткой для РПГА в разведении 1:10 и 10-50% взвесью несенсибилизированных эритроцитов барана. Диагностическую сыворотку разводят в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и получают 10 мл сыворотки в разведении 1:100.

Взятую от больного на исследование сыворотку крови инактивируют прогреванием в инактиваторе (или на водяной бане) 30 мин при 56 °С. Готовят рабочее разведение сыворотки 1:100. Для этого вносят 0,1 мл цельной сыворотки в пробирку, содержащую 9,0 мл изотонического раствора натрия хлорида с 1 % формалина. Последний получают внесением 40% раствора формалина в 0,9% раствор натрия хлорида в соотношении 1:100. Тщательно перемешивают и используют в реакции.

Иногда в целях удаления гетерогенных антител к бараньим эритроцитам сыворотки предварительно обрабатывают 10-50% взвесью формалинизированных бараньих эритроцитов. Для этого эритроциты добавляют из расчета 2 капли (по 0,05 мл) на 1 мл сыворотки и тщательно перемешивают встряхиванием. Сыворотку оставляют до полного оседания эритроцитов, либо центрифугируют через 1 ч инкубации при комнатной температуре, после чего она готова к исследованию.

Эритроцитарный диагностикум используют в рабочем разведении смешивая 1 мл диагностикума и 5 мл изотонического раствора с 1 % формалина.

1. Техника постановки. Реакцию ставят в планшетах для иммунологических исследований. В начале в лунки первого ряда планшета вносят по 0,05 мл изотонического раствора натрия хлорида. Затем в первую лунку добавляют 0,05 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:100, перемешивают. Получают разведение сыворотки 1:200, из этой лунки переносят во вторую 0,05 мл сыворотки. Перемешивают, получают разведение 1:400. Затем 0,05 мл сыворотки из второй лунки переносят в третью. Получают разведение сыворотки 1:800 и т. д., проводя двукратные последовательные разведения сыворотки до уровня удвоенного диагностического титра. Из последней лунки диагностического ряда отбирают 0,05 мл с тем, чтобы объем жидкости был одинаков во всех лунках. После этого к разведенной сыворотке добавляют по 0,05 мл эритроцитарного антигенного диагностикума. Внесение равного объема диагностикума приводит к дополнительному двукратному разведению сыворотки в каждой лунке. Так, в первой лунке разведение становится 1:400, во второй — 1:800, в третьей-1:1600 и т.д.

Ставят 3 контроля:
— контрольная иммунная сыворотка в разведении от 1:100 в объеме 0,05 мл + 0,05 мл 1% взвеси диагностикума (положительный контроль);
— отрицательный контроль—взвесь диагностикума с нормальной сывороткой в таких же дозах;
— отрицательный контроль —0,05 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:50 + 0,05 мл 1% взвеси несенсибилизированных эритроцитов.

Планшет закрывают крышкой и выдерживают при 37 °С 2 ч. Проводят предварительный учет результатов. Затем оставляют при комнатной температуре на 20-24 ч и делают окончательное заключение.

Читайте также:  ЛФК при гонартрозе коленного сустава 3 степени. Эффективные упражнения при гонартрозе коленного сустава

2. Учет результатов начинают с контролей. Затем оценивают диагностические реакции по четырехплюсовой системе:

++++ резко положительная реакция; эритроциты покрывают дно лунки в виде перевернутого зонтика с неровными краями;

+++ положительная реакция; эритроциты покрывают дно лунки в виде перевернутого зонтика, в центре которого просматривается небольшое кольцо из эритроцитов, не вступивших в реакцию;

++ положительная реакция; размер перевернутого зонтика небольшой, так как количество скученных эритроцитов невелико; остается значительное количество не склеившихся эритроцитов;

+ отрицательная реакция; эритроциты, не вступившие в агглютинацию, оседают на дно лунки в виде маленького диска (пуговки), вокруг которого незначительный ореол скученных эритроцитов; отрицательная реакция; осадок эритроцитов на дне в виде компактного диска (пуговки).

Титром антител считают разведение сыворотки, в котором РПГА положительна не менее, чем на ++ в самом большом разведении при полном отсутствии гемагглютинации в отрицательных контролях. Однако, так же как и при реакции агглютинации, необходимо проследить за его нарастанием через 10-14 дней.

б) Методика РПГА для обнаружения антигена. Для постановки реакции необходимы:
— исследуемый материал, содержащий антиген;
— эритроцитарный антительный диагностикум;
— изотонический раствор натрия хлорида;
— нормальная сыворотка кролика;
— препараты для постановки контролей (см. ниже);
— планшеты для иммунологических реакций с 96 круглодонными лунками;
— микропипетки.

Диагностикум эритроцитарный антительный выпускают в виде сухой взвеси формалинизированных танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных иммуноглобулином сыворотки. Препарат ампулирован и имеет вид таблетки светло-коричневого цвета, легко растворимой в изотоническом растворе натрия хлорида.

Вместе со специфическим препаратом в коробке имеются контрольные препараты:
— ампула с формалинизированными танизированными, но не сенсибилизированными эритроцитами;
— 10-50% взвесь формалинизированных эритроцитов для адсорбции гетерогенных антител;
— взвесь стандартного антигена, гомологичного иммуноглобулинам сыворотки, использованной для сенсибилизации эритроцитов;
— иммунная сыворотка к искомому антигену.

1. Техника постановки. Предварительно из инактивированной нормальной сыворотки кролика в разведении 1:100 готовят раствор для разведения. Для этого в пробирку наливают 9,9 мл изотонического раствора натрия хлорида, к которому добавляют 0,1 мл сыворотки кролика. Этот раствор вносят микропипетками в дозе 0,05 мл в 7 лунок первого ряда планшета для иммунологических реакций. Затем в первую лунку добавляют 0,05 мл искомого антигена в разведении 1:5, получают разведение 1:10. Из этой лунки 0,05 мл переносят во вторую лунку, перемешивают, получают разведение 1:20 и так последовательно делают разведения антигена с шагом 2. Из последней лунки диагностического ряда выливают 0,05 мл раствора, чтобы объем антигена был одинаков во всех лунках. После этого в каждую лунку вносят по 0,05 мл эритроцитарного антителъного диагностикума в концентрации, указанной в наставлении к препарату. Это приводит к дополнительному разведению антигена, и в первой лунке конечное разведение антигена составит 1:20, во второй — 1:40, в третьей— 1:80 и т.д.

— положительный контроль — стандартный известный антиген в рабочем разведении + эритроцитарный антительный диагностикум;

— отрицательный контроль — аналогичный исследуемому материалу субстрат, но заведомо не содержащий антигена + эритроцитарный антительный диагностикум;

— отрицательный контроль — исследуемый материал + десенсибилизированные эритроциты для исключения неспецифического склеивания эритроцитов. При исследовании крови этот контроль может оказаться положительным. В этом случае перед постановкой реакции проводят сорбцию исследуемого образца десенсибилизированными эритроцитами.

2. Учет результатов проводят так же, как и в предыдущем методе. Титром антигена считают дозу, с которой эритроцитарный антительный диагностикум реагирует в реакции гемагглютинации на ++ в самом большом разведении при полном отсутствии гемагглютинации в отрицательном контроле.

в) РПГА для определения классов иммуноглобулинов. РПГА может применяться не только для обнаружения и установления титра антител в сыворотке крови, но и для определения их принадлежности к определенному классу иммуноглобулинов (IgM или IgG). Это бывает важно для выявления внутриутробного инфицирования, установления периода развития или рецидива болезни. Дифференцировка макро (IgM)- и микро (IgG) — глобулинов основана на различиях их свойств. Одним из методов является инактивация крупномолекулярных IgM редуцирующими веществами (цистеином или 2-меркаптоэтанолом). При этом происходит разрыв их дисульфидных связей с образованием неактивных субъединиц. Молекулы же IgG не меняют свою структуру и сохраняют антительную активность. Методика с использванием цистеина для этих целей (по Е. В. Чернохвостовой, 1965) описана ниже.

1. Техника постановки. Навеску цистеина 314 мг растворяют в 10 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида. Исследуемую сыворотку разводят ФСБ pH 7,2 в соотношении 1:5 и делят на 2 части, разливая в пробирки. В одну из них добавляют равный объем приготовленного раствора цистеина, в другую—равный объем изотонического раствора натрия хлорида. Пробирки со смесями закрывают резиновыми пробками и выдерживают 18-20 ч в термостате при 37 °С.

После инкубации сыворотки разводят двукратно и используют в РПГА. В одном ряду лунок ставят реакцию с сывороткой, не обработанной цистеином, в другом — с сывороткой, обработанной цистеином.

2. Учет результатов проводят как обычно по 4-плюсовой системе в обоих рядах лунок.

Если титры антител в обоих рядах совпадают, это свидетельствует о том, что антитела сыворотки относятся к классу IgG. Если же они в ряду, где использовалась сыворотка, обработанная цистеином, ниже в 4 раза и более, чем в ряду, где сыворотка не обрабатывалась цистеином, антитела относятся к классу IgM.

Для определения классов антител аналогичным способом может быть использована и РСК.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 17.08.2019

Иногда в целях удаления гетерогенных антител к бараньим эритроцитам сыворотки предварительно обрабатывают 10-50% взвесью формалинизированных бараньих эритроцитов. Для этого эритроциты добавляют из расчета 2 капли (по 0,05 мл) на 1 мл сыворотки и тщательно перемешивают встряхиванием. Сыворотку оставляют до полного оседания эритроцитов, либо центрифугируют через 1 ч инкубации при комнатной температуре, после чего она готова к исследованию.

Расшифровка анализа

При добавлении сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, инфицированного сифилисом, к реагенту, с которым проводится исследование, происходит агглютинация эритроцитов, вследствие чего они выпадают в осадок.

На количество склеенных эритроцитов влияет уровень содержания антител в сыворотке. Поэтому пассивная гемагглютинация не только показывает присутствие антител, но и позволяет установить их количество. Результат исследования представлен уровнем титра антител.

Положительная реакция говорит о наличии возбудителя болезни в организме пациента. Однако в процессе проведения диагностики возможно появление ложноположительных реакций, количество которых статистически не превышает уровня 0,05-2,5% от общего числа исследований.

Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

  • системных заболеваний соединительной ткани,
  • в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
  • физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
  • гепатита В или С,
  • онкологических заболеваний,
  • тифа, лептоспироза, туберкулеза,
  • ВИЧ-инфекции,
  • боррелиоза клещевой этиологии,
  • обширных травм или переломов,
  • беременности,
  • в случае проведения инъекций наркотических препаратов.

В большинстве случаев ложноположительные реакции сопровождаются низким титром. Высокие показатели титра типичны для вторичной стадии болезни и ранее скрытого сифилиса. Однако они могут появиться и при ложноположительной реакции у пациентов со злокачественными новообразованиями.

У людей, хотя бы однажды переболевших сифилисом, реакция РПГА до конца жизни остается положительной.

Редкими исключениями могут служить те ситуации, когда болезнь была выявлена на ранней стадии развития, после чего была проведена интенсивная и эффективная терапия. Поэтому анализ РПГА не может использоваться для оценки динамики выздоровления или сравнительной диагностики ранней или поздней стадий болезни.

При получении положительной реакции необходимо обследовать членов семьи заболевшего человека и людей, вступавших с ним в половой контакт.

Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:

  • человек не болен сифилисом,
  • неправильно взята кровь для исследования,
  • после заражения прошло 2-4 недели, и выработка антител еще не началась.

В любом случае результат исследования необходимо оценивать в сочетании с дополнительными лабораторными и анамнестическими показателями.


Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:

Анализ крови РПГА — реакция пассивной гемагглютинации. Рпга анализ крови что это

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА/РНГА) основана на способности эритроцитов различных видов животных, птиц и человека (I(0) группы крови) адсорбировать на своей поверхности растворимые антигены бактерий или антитела.

Многие антигены бактерий способны спонтанно (антигены полисахаридной природы) или после предварительной обработки танином, бензидином или глюта-ровым альдегидом (антигены белковой природы) адсорбироваться на эритроцитах.

Такие комплексы называют эритроцитарными антигенными диагностикумами.

Иммуноглобулины также могут использоваться для сенсибилизации эритроцитов. В этом случае получают эритроцитарные антительные диагностикумы.

Участие эритроцитарных диагностикумов в специфических иммунных реакциях антиген—антитело обеспечивает пассивное скучивание и выпадение в осадок эритроцитов.

Реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) применяют с целью:
— обнаружения антител в сыворотке крови путем использования известного эритроцитарного антигенного диагностикума;
— выявления неизвестного антигена на основе его взаимодействия с известным эритроцитарным антительным диагностикумом.

а) Методика РПГА для обнаружения антител в сыворотке крови больных. Для постановки реакции необходимы:
— исследуемая инактивированная сыворотка больного (прогретая при 56 °С 30 мин);
— эритроцитарный антигенный диагностикум;
— гомологичная антигену контрольная иммунная сыворотка для РПГА в разведении 1:10;
— изотонический раствор натрия хлорида pH 7,0 ± 0,5;
— 40% раствор формалина;
— 10-50% взвесь несенсибилизированных эритроцитов барана;
— планшеты для иммунологических реакций с 96 круглодонными лунками;
— микропипетки.

Антигенные эритроцитарные диагностикумы представляют собой лиофилизированную в фосфатно-буферном растворе 1-10% взвесь эритроцитов барана, предварительно формалинизированных и сенсибилизированных антигеном микроорганизмов. Консервантом является формалин в конечной концентрации 0,5%. Диагностикумы выпускают в жидком или лиофильно-высушенном виде. В последнем случае они представляют собой аморфную массу, сформированную в таблетки красно-коричневого цвета. Регидратированный препарат готовят путем разведения этих таблеток в 10 мл 0,9% раствора натрия хлорида и получают 1% рабочую взвесь. Диагностикумы выпускают в комплекте с гомологичной диагностической агглютинирующей сывороткой для РПГА в разведении 1:10 и 10-50% взвесью несенсибилизированных эритроцитов барана. Диагностическую сыворотку разводят в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и получают 10 мл сыворотки в разведении 1:100.

Взятую от больного на исследование сыворотку крови инактивируют прогреванием в инактиваторе (или на водяной бане) 30 мин при 56 °С. Готовят рабочее разведение сыворотки 1:100. Для этого вносят 0,1 мл цельной сыворотки в пробирку, содержащую 9,0 мл изотонического раствора натрия хлорида с 1 % формалина. Последний получают внесением 40% раствора формалина в 0,9% раствор натрия хлорида в соотношении 1:100. Тщательно перемешивают и используют в реакции.

Читайте также:  Идут ли месячные при внематочной беременности, могут ли быть менструации

Иногда в целях удаления гетерогенных антител к бараньим эритроцитам сыворотки предварительно обрабатывают 10-50% взвесью формалинизированных бараньих эритроцитов. Для этого эритроциты добавляют из расчета 2 капли (по 0,05 мл) на 1 мл сыворотки и тщательно перемешивают встряхиванием. Сыворотку оставляют до полного оседания эритроцитов, либо центрифугируют через 1 ч инкубации при комнатной температуре, после чего она готова к исследованию.

Эритроцитарный диагностикум используют в рабочем разведении смешивая 1 мл диагностикума и 5 мл изотонического раствора с 1 % формалина.

1. Техника постановки. Реакцию ставят в планшетах для иммунологических исследований. В начале в лунки первого ряда планшета вносят по 0,05 мл изотонического раствора натрия хлорида. Затем в первую лунку добавляют 0,05 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:100, перемешивают. Получают разведение сыворотки 1:200, из этой лунки переносят во вторую 0,05 мл сыворотки. Перемешивают, получают разведение 1:400. Затем 0,05 мл сыворотки из второй лунки переносят в третью. Получают разведение сыворотки 1:800 и т. д., проводя двукратные последовательные разведения сыворотки до уровня удвоенного диагностического титра. Из последней лунки диагностического ряда отбирают 0,05 мл с тем, чтобы объем жидкости был одинаков во всех лунках. После этого к разведенной сыворотке добавляют по 0,05 мл эритроцитарного антигенного диагностикума. Внесение равного объема диагностикума приводит к дополнительному двукратному разведению сыворотки в каждой лунке. Так, в первой лунке разведение становится 1:400, во второй — 1:800, в третьей-1:1600 и т.д.

Ставят 3 контроля:
— контрольная иммунная сыворотка в разведении от 1:100 в объеме 0,05 мл + 0,05 мл 1% взвеси диагностикума (положительный контроль);
— отрицательный контроль—взвесь диагностикума с нормальной сывороткой в таких же дозах;
— отрицательный контроль —0,05 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:50 + 0,05 мл 1% взвеси несенсибилизированных эритроцитов.

Планшет закрывают крышкой и выдерживают при 37 °С 2 ч. Проводят предварительный учет результатов. Затем оставляют при комнатной температуре на 20-24 ч и делают окончательное заключение.

2. Учет результатов начинают с контролей. Затем оценивают диагностические реакции по четырехплюсовой системе:

++++ резко положительная реакция; эритроциты покрывают дно лунки в виде перевернутого зонтика с неровными краями;

+++ положительная реакция; эритроциты покрывают дно лунки в виде перевернутого зонтика, в центре которого просматривается небольшое кольцо из эритроцитов, не вступивших в реакцию;

++ положительная реакция; размер перевернутого зонтика небольшой, так как количество скученных эритроцитов невелико; остается значительное количество не склеившихся эритроцитов;

+ отрицательная реакция; эритроциты, не вступившие в агглютинацию, оседают на дно лунки в виде маленького диска (пуговки), вокруг которого незначительный ореол скученных эритроцитов; отрицательная реакция; осадок эритроцитов на дне в виде компактного диска (пуговки).

Титром антител считают разведение сыворотки, в котором РПГА положительна не менее, чем на ++ в самом большом разведении при полном отсутствии гемагглютинации в отрицательных контролях. Однако, так же как и при реакции агглютинации, необходимо проследить за его нарастанием через 10-14 дней.

б) Методика РПГА для обнаружения антигена. Для постановки реакции необходимы:
— исследуемый материал, содержащий антиген;
— эритроцитарный антительный диагностикум;
— изотонический раствор натрия хлорида;
— нормальная сыворотка кролика;
— препараты для постановки контролей (см. ниже);
— планшеты для иммунологических реакций с 96 круглодонными лунками;
— микропипетки.

Диагностикум эритроцитарный антительный выпускают в виде сухой взвеси формалинизированных танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных иммуноглобулином сыворотки. Препарат ампулирован и имеет вид таблетки светло-коричневого цвета, легко растворимой в изотоническом растворе натрия хлорида.

Вместе со специфическим препаратом в коробке имеются контрольные препараты:
— ампула с формалинизированными танизированными, но не сенсибилизированными эритроцитами;
— 10-50% взвесь формалинизированных эритроцитов для адсорбции гетерогенных антител;
— взвесь стандартного антигена, гомологичного иммуноглобулинам сыворотки, использованной для сенсибилизации эритроцитов;
— иммунная сыворотка к искомому антигену.

1. Техника постановки. Предварительно из инактивированной нормальной сыворотки кролика в разведении 1:100 готовят раствор для разведения. Для этого в пробирку наливают 9,9 мл изотонического раствора натрия хлорида, к которому добавляют 0,1 мл сыворотки кролика. Этот раствор вносят микропипетками в дозе 0,05 мл в 7 лунок первого ряда планшета для иммунологических реакций. Затем в первую лунку добавляют 0,05 мл искомого антигена в разведении 1:5, получают разведение 1:10. Из этой лунки 0,05 мл переносят во вторую лунку, перемешивают, получают разведение 1:20 и так последовательно делают разведения антигена с шагом 2. Из последней лунки диагностического ряда выливают 0,05 мл раствора, чтобы объем антигена был одинаков во всех лунках. После этого в каждую лунку вносят по 0,05 мл эритроцитарного антителъного диагностикума в концентрации, указанной в наставлении к препарату. Это приводит к дополнительному разведению антигена, и в первой лунке конечное разведение антигена составит 1:20, во второй — 1:40, в третьей— 1:80 и т.д.

— положительный контроль — стандартный известный антиген в рабочем разведении + эритроцитарный антительный диагностикум;

— отрицательный контроль — аналогичный исследуемому материалу субстрат, но заведомо не содержащий антигена + эритроцитарный антительный диагностикум;

— отрицательный контроль — исследуемый материал + десенсибилизированные эритроциты для исключения неспецифического склеивания эритроцитов. При исследовании крови этот контроль может оказаться положительным. В этом случае перед постановкой реакции проводят сорбцию исследуемого образца десенсибилизированными эритроцитами.

2. Учет результатов проводят так же, как и в предыдущем методе. Титром антигена считают дозу, с которой эритроцитарный антительный диагностикум реагирует в реакции гемагглютинации на ++ в самом большом разведении при полном отсутствии гемагглютинации в отрицательном контроле.

в) РПГА для определения классов иммуноглобулинов. РПГА может применяться не только для обнаружения и установления титра антител в сыворотке крови, но и для определения их принадлежности к определенному классу иммуноглобулинов (IgM или IgG). Это бывает важно для выявления внутриутробного инфицирования, установления периода развития или рецидива болезни. Дифференцировка макро (IgM)- и микро (IgG) — глобулинов основана на различиях их свойств. Одним из методов является инактивация крупномолекулярных IgM редуцирующими веществами (цистеином или 2-меркаптоэтанолом). При этом происходит разрыв их дисульфидных связей с образованием неактивных субъединиц. Молекулы же IgG не меняют свою структуру и сохраняют антительную активность. Методика с использванием цистеина для этих целей (по Е. В. Чернохвостовой, 1965) описана ниже.

1. Техника постановки. Навеску цистеина 314 мг растворяют в 10 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида. Исследуемую сыворотку разводят ФСБ pH 7,2 в соотношении 1:5 и делят на 2 части, разливая в пробирки. В одну из них добавляют равный объем приготовленного раствора цистеина, в другую—равный объем изотонического раствора натрия хлорида. Пробирки со смесями закрывают резиновыми пробками и выдерживают 18-20 ч в термостате при 37 °С.

После инкубации сыворотки разводят двукратно и используют в РПГА. В одном ряду лунок ставят реакцию с сывороткой, не обработанной цистеином, в другом — с сывороткой, обработанной цистеином.

2. Учет результатов проводят как обычно по 4-плюсовой системе в обоих рядах лунок.

Если титры антител в обоих рядах совпадают, это свидетельствует о том, что антитела сыворотки относятся к классу IgG. Если же они в ряду, где использовалась сыворотка, обработанная цистеином, ниже в 4 раза и более, чем в ряду, где сыворотка не обрабатывалась цистеином, антитела относятся к классу IgM.

Для определения классов антител аналогичным способом может быть использована и РСК.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 17.08.2019

Диагностикум эритроцитарный антительный выпускают в виде сухой взвеси формалинизированных танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных иммуноглобулином сыворотки. Препарат ампулирован и имеет вид таблетки светло-коричневого цвета, легко растворимой в изотоническом растворе натрия хлорида.

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.

  • системных заболеваний соединительной ткани,
  • в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
  • физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
  • гепатита В или С,
  • онкологических заболеваний,
  • тифа, лептоспироза, туберкулеза,
  • ВИЧ-инфекции,
  • боррелиоза клещевой этиологии,
  • обширных травм или переломов,
  • беременности,
  • в случае проведения инъекций наркотических препаратов.

Отрицательный

Отрицательный результат – тоже результат! В случае с анализами на сифилис реакция на такой результат часто положительная. Но не стоит забывать, что такой ответ на пробу РПГА можно получить вследствие разных причин.

  • Первая и самая удачная для проходящего тест человека – реакция отрицательная, потому что человек не болен сифилисом.
  • Вторым вариантом получения такого результата может быть нарушение технологии сбора крови и другие ошибки медицинского персонала.
  • И третья, наиболее неприятная для пациента ситуация, когда человек на самом деле, уже заражен сифилисом, но организм еще не среагировал, и выработка антител пока не началась. В таком случае анализ дает ложноотрицательную реакцию.

Из этого следует, что если вы подозреваете у себя сифилис и получили отрицательные результаты обследования, то стоит повторить тест через некоторое время или обратиться к другим методам диагностики.


Из этого следует, что если вы подозреваете у себя сифилис и получили отрицательные результаты обследования, то стоит повторить тест через некоторое время или обратиться к другим методам диагностики.

Добавить комментарий